.jpg)
A pesar de que solo se informaron inicialmente algunas transmisiones de persona a animal del síndrome respiratorio agudo severo coronavirus 2 (SARS-CoV-2), se ha encontrado que varias especies animales son susceptibles al SARS-CoV-2. Como resultado, la Organización Mundial de Sanidad Animal ha definido al COVID-19 como una Enfermedad Emergente en los animales.
Estudiar: El mapeo detallado del epítopo de la nucleoproteína del SARS-CoV-2 revela una inmunorespuesta específica en gatos y perros alojados con pacientes con COVID-19. Haber de imagen: Ermolaev Alejandro/Shutterstock.com
Anteriormente, se desarrolló un inmunoensayo novedoso basado en perlas paramagnéticas recubiertas con nucleoproteína (Np) de SARS-CoV-2 recombinante y un sistema basado en citometría de flujo. Este ensayo se usó para evaluar ambas muestras recolectadas de gatos y perros durante la era anterior a la pandemia y la actual para determinar la susceptibilidad de estos animales domésticos al SARS-CoV-2.
Las pruebas con este ensayo demostraron que tanto las proteínas del pico (S) como de la nucleocápside (N) del SARS-CoV-2 son igualmente sensibles, especialmente en la fase temprana de la infección. Además, el uso de ensayos de neutralización como la prueba de neutralización por reducción de placas (PRNT) también podría funcionar como estándares de referencia para confirmar resultados positivos para ensayos serológicos basados en N y S.
Sobre el estudio
En una reciente Investigación en Ciencias Veterinarias estudio, los investigadores realizaron un mapeo detallado del epítopo de Np y desarrollaron un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) basado en antígeno doble experimental utilizando la subunidad C-terminal conjugada de peroxidasa de rábano picante (HRP).
En este estudio, las secuencias de nucleótidos para la proteína N del SARS-CoV-2 y la aislada de otros coronavirus asociados a animales, así como el SARS-CoV-1 y el coronavirus del síndrome respiratorio de Oriente Medio (MERS-CoV), se obtuvieron de GenBank para alineaciones de secuencias. Además, se recolectaron muestras de suero humano de 23 pacientes con COVID-19, que consistieron en 13 hombres y 10 mujeres desde marzo de 2020 hasta noviembre de 2020.
En general, se recolectaron 506 sueros de animales durante el mismo período de tiempo. Entre estas muestras, 15 animales dieron positivo para SARS-CoV-2. En particular, todos los sueros animales se analizaron con pruebas ELISA y PRNT de doble antígeno.
Se utilizó un conjunto de sueros prepandémicos de 234 perros y 35 gatos para evaluar la especificidad del ensayo de doble antígeno Np. También se analizaron tres sueros de gatos que previamente dieron positivo para coronavirus felino, tres sueros de perro que dieron positivo para coronavirus respiratorio canino, cinco sueros de perro que dieron positivo para coronavirus entérico canino y ocho sueros bovinos que dieron positivo para coronavirus bovino.
Los investigadores también probaron un suero hiperinmune generado en una cabra que fue inmunizada repetidamente con el Np recombinante completo que se expresó en E. coli como su control positivo.
Hallazgos del estudio
En general, se expresaron nueve subunidades en el sistema procariótico. El panel de suero de pacientes humanos fue reactivo principalmente contra la mitad C-terminal de Np con un menor grado de reactividad. Este hallazgo indica que la región inmunodominante de Np está ubicada entre los fragmentos D y E, superponiéndose potencialmente con pocos residuos aguas arriba y aguas abajo.
Los sueros de un perro hospitalizado por neumonía intersticial se compararon con un conjunto de sueros de animales de compañía alojados con pacientes con COVID-19. Estas muestras se analizaron frente a las mismas nueve subunidades ELISA y se encontró que eran altamente reactivas frente al mismo fragmento superpuesto (D + E) reconocido por los sueros humanos. Una vez que se identificó esta región inmunodominante de D+E, se desarrolló el ELISA de doble antígeno para detectar inmunoglobulinas (Igs) aisladas de múltiples especies.
También se observó que los sueros de la era prepandémica, así como los obtenidos de animales infectados naturalmente con diferentes coronavirus, estaban muy por debajo del valor de corte para la prueba ELISA de doble antígeno. Sin embargo, se encontró que tres sueros de perros de 278 eran reactivos mediante ELISA de doble antígeno. Entre estas muestras, un suero provocó una alta reactividad contra el antígeno del coronavirus respiratorio canino (CRCoV), mientras que el otro fue completamente negativo para los antígenos del CRCoV y del coronavirus entérico canino.
Conclusiones
En conjunto, el estudio actual encontró que el mapeo de epítopos de SARS-CoV-2 Np condujo a la identificación de la región inmunodominante ubicada en la porción C-terminal de la proteína. Un ELISA basado en doble antígeno que utiliza esta porción como conjugado de HRP mejora las pruebas serológicas de varios animales y, por lo tanto, podría ser una herramienta útil para el seguimiento multiespecies de COVID-19 en animales susceptibles.
