Una entrevista con Christoph Metzner, Universidad de Viena
Sinopsis
Varias infecciones virales aún representan una gran amenaza para la salud humana y animal. Una amplia gama de especies virales están rodeadas por una cubierta lipídica, la envoltura, que contiene proteínas virales y celulares.
El grupo de virus envueltos contiene especies de importancia médica y biotécnica, como miembros de las familias Retro- (VIH), Filo- (Ébola), Flavi- (Nilo occidental, Zika, Dengue) y Orthomyxoviridae (Influenza), por nombrar solo algunos. .
La contribución de los elementos proteicos de la envoltura a la reproducción y patología viral está ampliamente estudiada. Estamos más interesados en la contribución de los elementos lipídicos, especialmente en el comportamiento de las envolturas virales (lipídicas) después de estímulos biofísicos y bioquímicos.
Además, tratamos de usar esta información en la modificación de superficies de virus envueltos (es decir, Retro/Lentivirus) para aplicaciones en terapia génica y desarrollo de vacunas. Una herramienta importante que tratamos de desarrollar son los sistemas multiparamétricos de detección de partículas individuales.
El último punto es el más importante para adquirir datos confiables sobre la homogeneidad de las muestras, respondiendo preguntas como: ¿en qué medida las partículas virales individuales difieren entre sí con respecto a las propiedades morfológicas, biofísicas o bioquímicas?
¿Son reconocibles diferentes poblaciones (es decir, contaminación por otras vesículas/partículas o subpoblaciones de partículas de virus)? – TRPS proporciona una vía de acceso al tema al medir el tamaño y la carga de partículas individuales, parámetros clave para describir las poblaciones virales.
Además, dado que los EV a menudo contaminan las preparaciones virales, para nuestros propósitos sería más importante una selección negativa para EV (es decir, eliminar EV de las muestras virales). Sin embargo, una purificación de virus rápida, confiable y rentable como la proporcionada por las columnas qEV es muy bienvenida para nuestra investigación.
¿Qué importancia tiene la medición de partículas individuales en su trabajo?
Muy. De alguna manera comparable con el control de calidad en los procesos de fabricación: las células producen una gran cantidad de partículas (no exclusivamente virales) y para poder investigar sobre ellas necesitamos saber qué tanto (o no) se parecen entre sí.
¿Qué ventajas tiene el qEV método de aislamiento de virus tiene para usted en comparación con las otras opciones?
Sobre todo la velocidad y el procedimiento simple (y suave) que reduce el tiempo y el estrés químico. Ambos significan que podemos mantener las partículas funcionales (y/o infecciosas) tanto como sea posible.
¿Qué tan ampliamente se entiende este problema de la contaminación de exosomas en la muestra de virus, dado que son de tamaño similar?
Me sentiría tentado a decir que no mucho. A medida que emerge, la interacción entre los diferentes tipos de partículas parece ser bastante estrecha. Principalmente, la naturaleza de ambos, el virus y la célula infectada, decidirán. Sin embargo, dibujar líneas claras puede ser muy difícil.
¿Puede distinguir los virus de los exosomas de fondo mediante la medición de carga innata, o tal vez conectando una sonda cargada con su técnica de pintura de virus?
Para la primera parte, en algunos casos, supongo que sí. Sin embargo, que yo sepa, esto no se ha probado todavía. Elegir el par correcto ayudaría. Para la segunda parte, no con la pintura molecular (actualmente, no discrimina entre diferentes tipos de membranas. Sin embargo, puede usarlo para discriminar partículas unidas a la membrana de las partículas de la cápside proteica). En cualquier caso, la calidad de los marcadores sería el tema crítico.
¿Puede utilizar la medición en tiempo real de los cambios dinámicos causados por los estímulos biofísicos y bioquímicos que mencionó anteriormente? ¿Es eso útil?
Sí, hasta ahora estamos utilizando técnicas biofísicas bastante complejas para evaluar las propiedades de unión a granel. Se vuelve más útil (e interesante) cuando podemos vincular esta información a las funciones del virus.
¿Cuál es el nivel de resolución de carga que le gustaría poder utilizar en su trabajo? ¿Qué podría ofrecer la capacidad de medición de carga mejorada?
La primera parte de la pregunta es difícil de responder. Dado que faltan datos que comparen sistemáticamente los datos de carga entre vesículas. Entonces, la respuesta probablemente no muy útil sería la resolución más alta posible. Para la segunda parte: si bien las membranas pueden no diferir demasiado en la carga, las especies de proteínas dominantes en las vesículas pueden muy bien (como resultado de sus puntos isoeléctricos). Estoy pensando que ir allí podría ser más útil.
¿Cuáles son los principales retos analíticos en el campo de los vectores virales? Parece que un método para separar los exosomas de los virus podría estar en esa lista.
El control de calidad está seguro en la agenda. Una forma rápida de medir partículas infecciosas en total. Un buen sustituto (conjunto de) parámetro(s) para la infectividad (que requiere por definición un trabajo de cultivo celular engorroso) también sería muy bienvenido.
